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                        國家一級期刊

                        國際刊號:  國內刊號:41-1434/TS  郵發代號:35-53
                        現代食品

                        期刊名稱:現代食品
                        英文名稱:Modern Food

                        主管單位:中糧工程科技有限公司
                        主辦單位:鄭州中糧科研設計院有限公司
                        編輯出版:現代食品雜志社

                        主  編:陳華定
                        社  長:吳祖風
                        責任編輯:吳祖風(兼)高惠文
                        英文審校:吳祖風
                        編  輯:李 琦

                        電  話:0371-56092565
                             0371-63731409
                        編輯QQ:2836192365
                             3298264075
                             2740137648
                             1252528457
                        郵  箱:xdspbjb@163.com

                        國際刊號:ISSN 2096-5060
                        國內刊號:CN 41-1434/TS
                        郵發代號:36-53
                        發行范圍:國內外統一發行
                        廣告許可:鄭惠濟市監廣發登字(2019)001號
                        社  址:河南省鄭州市南陽路153號
                        首頁 > 豆豉纖溶酶的溶血栓作用研究

                        豆豉纖溶酶的溶血栓作用研究

                        2015-12-25 17:32:46     字體:   打印 收藏


                        摘 要:豆豉纖溶酶(Douchi Fibrinolytic Enzyme,DFE)是一種具有強烈纖溶活性的絲氨酸蛋白酶,來源于中國傳統發酵食品——豆豉。它能直接降解血栓中的交聯纖維蛋白,具有良好的溶栓作用。本文綜述了DFE的理化特性和溶栓作用,為利用其制備口服溶栓制劑指明了方向。

                        關鍵詞:豆豉纖溶酶;溶血栓作用;研究

                          血栓栓塞性疾病對于人類的健康有很大的影響,嚴重時會威脅生命,且后遺癥嚴重,是繼癌癥之后的第二大類疾病[1]。世界衛生組織的統計分析表明,全世界死于血栓栓塞性疾病的人數約為2 600萬人/年,我國每年心血管疾病死亡者占因病死亡總人數的40.7%,這一比例遠高于癌癥,位于各類致死疾病的第一位[2]。

                          使用溶栓酶藥物被認為是血栓性疾病最有效的治療方法,如尿激酶、鏈激酶、水蛭素等,但這些藥物都在不同程度上存在著缺點[3]:如分子量較大,不易吸收;半衰期短(僅有3~20 min);出血性副作用大;成本高,價格昂貴;只能靜脈給藥,使用不便等,很難被大眾所廣泛接受。

                          豆豉纖溶酶(Douchi Fibrinolytic Enzyme,DFE),是繼納豆激酶(Nattokinase,NK)之后發現的又一種具有強烈溶解血栓纖維蛋白功能的絲氨酸蛋白酶。該酶是從我國的傳統發酵食品——豆豉中分離出來的。2004年,彭勇等[4]測定了解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)DC-4產生的DFE基因全序列,1 149 bp的開放閱讀框,編碼382個氨基酸殘基,其中包括77個氨基酸的前肽和275個氨基酸的成熟肽。SDS-PAGE和等電聚焦電泳測得該酶分子量為28 kD,pI=8.0。最適pH值為9.0,最適溫度為48 ℃。DFE不僅可水解纖維蛋白,而且可水解許多人工合成的小分子四肽底物,尤其是枯草桿菌蛋白酶作用底物S-7388(Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA),苯甲基磺酰氟(PMSF)可完全抑制其溶纖維活性。這些結果表明,DFE屬于枯草桿菌蛋白酶家族的絲氨酸蛋白酶,與來源于納豆枯草芽孢桿菌的納豆激酶同源性為86.1%。研究表明,DFE能直接作用于血栓交聯纖維蛋白并將其水解,而對血漿纖維蛋白原不起作用,具有很好的溶栓活性(純化后比酶活達4 664.0 U/mg)[5]。

                          近年來,我國研究者將豆豉纖溶酶基因分別在原核和真核表達系統中進行表達,得到了具有活性的DFE。Zhang 等[6]將解淀粉芽孢桿菌DC-4的豆豉纖溶酶基因在大腸桿菌BL-21中表達,純化后比酶活可達4 597.0 U/mg,且證明DC-4菌株所產生的豆豉纖溶酶蛋白需要前肽才能進行正確的折疊。肖露等[7]將解淀粉芽孢桿菌的豆豉纖溶酶基因的前肽及成熟肽序列與淀粉酶基因的啟動子及信號肽融合,轉化枯草桿菌,重組豆豉纖溶酶比酶活為5 918.7 U/mg。張仁懷 等[8]將含有和不含前肽的豆豉纖溶酶基因在畢赤酵母中分別進行表達研究,發現用甲醇誘導時,在含有前肽的豆豉纖溶酶基因轉化的畢赤酵母工程菌的培養液中可檢測到較強的溶栓酶活性。

                          目前,開發溶栓能力強、價格低、副作用小、易吸收以及體內半壽期長的新型溶栓酶藥物是血栓性疾病治療研究的熱點。來源于傳統發酵食品的豆豉纖溶酶,可口服給藥,并且用于體內溶栓較為安全,有望被開發并研制成使用方便的新型口服溶栓藥物,在治療和預防血栓病方面有著很好的應用前景和廣闊的市場[9]。

                          參考文獻:

                          [1]孫月娥,王衛東,李超.不同溶栓酶的特點、作用與臨床應用研究進展[J].中國中藥雜志,2010,35(6):794-798.

                          [2]桂清.血栓性疾病已成為威脅人類健康和生命的重要疾病[J].中華檢驗醫學雜志,2004,8(27):487.

                          [3]Nakajima N,Taya N,Sumi H. Potent fibrinolytic enzyme from the lysate of Katsuwonuspelamis digestive tract(Shiokara):purification and characterization[J]. Biosci Biotechnol Biochem,1993,57(9):1604-1605.

                          [4]PengY,Yang X J,Xiao L,et al. Cloning and expression of a fibrinolytic enzyme (subtilisin DFE) gene from Bacillusamy loliquefaciens DC-4 inBacillus subtilis[J]. ResMicrobiol,2004,155(3):167-173.

                          [5]Peng Y,Huang Q,Zhang R H,et al. Purification and characterization of a fibrinolytic enzyme produced by Bacillus amyloliquefaciens DC-4 screened from douchi,a traditional Chinese soybean food[J]. CompBiochemPhys B,2003,134(1):45-52.

                          [6]Zhang R H,Xiao L,Peng Y,et al. Gene expression and characteristics of a novel fibrinolytic enzyme(subtilisin DFE) in Escherichina coli[J]. LettApplMicrobiol,2005,41(2):190-195.

                          [7]肖璐,張仁懷,張義正.豆豉溶栓酶工程茵的發酵條件及重組溶栓酶的分離純化[J].食品與發酵工業,2005,31(1):66-73.

                          [8]張仁懷,王海燕,談寧馨,等.豆豉溶栓酶基因在畢赤酵母中的表達及其產物的純化[J].應用與環境生物學報,2005,11(5):623-626.

                          [9]范曉丹,郭勇.豆豉纖溶酶——一種潛在的新型溶栓藥物[J].生命的化學,2005,25(5):427-429.

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